PCR实验室规划设计与建设指南

　　PCR实验室规划设计

　　标准PCR实验室分为四个区域：

　　N1.试剂配制区;

　　N2.样品处理区;

　　N3.核酸扩增区;

　　N4.产品分析区;

　　如果使用全自动分析仪，该区域可适当合并。

　　(进入每个工作区域必须严格按照一个方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服，如不同的颜色。工作人员离开工作区时，不得带出工作服)

　　PCR实验室平面布局

　　各区功能分别为

　　试剂准备区：扩增试剂的制备、分装、保存。

　　样品处理区：样品登记、分装、核酸提取、保存和加样。

　　扩增产品分析区：扩增产品的测定、结果分析、登记及报告。

　　扩增前区与扩增后区应严格分开，必须使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔。

　　少量试剂可在样品处理区配制。

　　样品处理区和试剂准备区在满足下列操作和清洁处理要求的前提下，可设置在同一房间：

　　在生物安全柜内操作;

　　每个实验人员。实验组分别使用自己的试剂和耗材;

　　储存污染物的器皿应密封并一次性使用;

　　实验前后对操作区域和共享设备进行清洁消毒。

　　PCR实验室建设规划要点。

　　1.主体结构：

　　主体为彩钢板。铝合金型材。室内所有阴角和阳角均采用铝合金50内圆角铝，解决易污染、积尘、不易清洗等问题。结构牢固，线条简洁，美观大方，密封性好。

　　2.标准三区分隔及气压调节：

　　PCR过程分为三个独立的试验区：试剂准备、标本制备和PCR扩增试验。整个区域有一个整体的缓冲走廊。每个独立的试验区都有一个缓冲区。同时，通过气压调节，试剂和标本在整个PCR试验过程中免受气溶胶污染，减少扩增产品对人员和环境的污染。

　　缓冲区一、缓冲区二、PCR扩增区排气扇可打开，试验区外墙和门上安装可调回风口，空气通过回风口进入室内通风。

　　3.消毒：

　　紫外线灯安装在三个实验区、三个缓冲区的顶部和传送窗内进行消毒。

　　移动紫外线灯也设置在试剂准备区和标本制备区，对试验桌进行局部消毒。

　　4.机械连锁不锈钢传输窗：

　　试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁)传输窗口传输，确保试剂和标本在传输过程中不受污染(人物分流)

　　5.地面。

　　地面建议采用聚氯乙烯卷材地面或自流平地面，完整性好。易于清洁，耐腐蚀。无条件的，水磨石地面或大瓷砖(至少800mm×800mm)接缝应小于2mm。

　　6.照明。

　　灯具应选用净化灯具，可达到易清洗、无尘的特点。

　　在施工过程中要注意。

　　●标准化的安装流程和全面的服务流程。

　　●严格按照规范科学设计的安装流程。

　　●安装前需要确定以下安装条件，如:电源电压、电源进线位置、电话网线进线位置、进水水压、安装空间相对较小、地面平整度、通风孔、进水管、下水管位置等。、理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。

　　设计要点

　　PCR实验室可以是分散或组合的。完成一组PCR实验通常需要四个实验过程：试剂准备、样品处理、核酸扩张和产品分析。如果需要实验过程，还应增加样品破碎过程。

　　一、分散PCR实验室。

　　所谓分散PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验室相距较远，布局分散。对于这种布局形式的PCR实验室，由于不易相互干扰，无需特殊条件。

　　二、组合PCR实验室。

　　所谓组合形式PCR实验室，是指完成PCR四个实验过程的实验室相邻布局，形成独立实验区的形式。对于组合形式的PCR实验室，由于各实验室的集中布局，容易相互干扰，因此对整体布局和屏障系统有一定的要求。每个房间都在入口处设置一个缓冲室，以减少室内外空气交换。

　　一些经验：

　　试剂制备室和样品处理室应为微正压，防止外界含有核酸气溶胶的空气进入，造成污染;

　　通过控制进风量大于排风量，可达到正压效果。

　　核酸扩增室和产品分析室应为微负压，防止含有核酸的气溶胶扩散污染试剂和样品，通过控制排气量大于进气量达到负压效果。

　　理想情况下，PCR实验室缓冲室可设置正压，使室内空气不流向室外，室外空气不流向室内。PCR实验室进气由原中央空调控制，要求中央空调出风口安装在指定点，地面铺设后高度为2600mm。

　　如果使用荧光PCR仪，扩增室和产品分析室可以合并。

　　如果房间深度允许，可以设置PCR内部专用走廊。需要指出的是，在减少室内外空气交换方面，缓冲房比专用走廊更有意义。

　　各区域之间应有单向实验流程、物流、人流和气流，形成单向工艺的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成污染，产生假结果。

　　实验室墙体，包括天花板，应结构牢固，气密性好;所有阴角应采用弧形线条过渡;墙体内壁干净，无吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝、无渗漏、干净、耐腐蚀的要求。

　　PCR实验室主要设备

　　试剂准备区。

　　仪器设备主要包括冰箱、超净平台、加样器、混匀器、平衡和离心机、加样器、平衡除特殊外，还应定期校准。试剂分装应在超净平台上进行扩增反应。混合物应与分子生物学进行比较。试剂准备好后，应进行质量检查：一是是否有污染。二是检测试剂的扩增效果。

　　标本制备区。

　　仪器设备主要包括生物安全柜、加样器、离心机、温育器、混匀器等。

　　扩增区

　　扩增区的主要仪器是核酸扩增器、超净台、微量取样器、离心机和移动紫外线灯。扩增器需要校准。并配备UPS电源，防止电压波动对扩增效果的影响。

　　分析区

　　本区域使用的仪器设备包括酶标记仪、洗板机、取样器、水浴箱等洁净实验区的缓冲区，部分面积不得超过主实验室的八分之一，有规定。

　　PCR实验室不容忽视的琐碎设计

　　1.实验室空调通风系统设计及压力控制。

　　PCR实验室没有严格的净化要求，但为了避免各实验区之间交叉污染的可能性，应采用全排气的气流组织形式。同时，严格控制输送和排气，确保各实验区的压力要求。

　　2.污染防治。

　　PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的污染类型有以下几种物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染和标本之间的污染。一旦发生污染，实验必须停止，直到找到污染源，实验结果必须无效，需要重新实验。因此，围绕实验室寻找污染源既耗时又繁琐，浪费人力物力。因此，要避免污染，首先要预防，而不是排除。

　　严格管理PCR实验室不可或缺。

　　(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室。如果条件允许，应设置独立通道和进出整个实验区的门;

　　(2)尽量减少实验区不必要的行走，以减少交叉污染的可能性。

　　(3)扩增产品分析区是扩增产品污染的主要来源。废液不能倒入实验室。消毒剂浸泡消毒后，必须远离实验室。吸头等一次性材料也应用消毒剂浸泡消毒，如焚烧;

　　(4)扩展产品分析区可能使用一些可能引起基因突变和有毒物质的物质，应特别注意实验人员的安全保护。3.5实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据不同实验室内容配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、取样器等。

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